水樣濾膜的保存

時(shí)間：2020-01-05作者：深圳市安必勝科技有限公司瀏覽：1357

作者：Suzanne kennedy 來源：美國MoBio實(shí)驗(yàn)室

較近收到很多咨詢，關(guān)于為了方便日后提取DNA，如何保存從海灣油污染海域收集到的水樣濾膜。本文將與大家分享MOBIO這方面的研究心得。下面是來自佐治亞州大學(xué)一位研究人員發(fā)來的郵件以及我們給出的回覆。

問題:

這周末我們將前往墨西哥灣和佛羅里達(dá)群島收集水樣用于微生物分析。因此想了解，如何保存過已過濾水樣的濾膜，方便后續(xù)使用你們的PowerWater Kit提取DNA。在野外，我們只能對(duì)水樣先過濾，再把濾膜帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行下一步提取操作。由于野外條件有限，是否有不依賴?yán)鋬龅谋ｕr方法？是否兼容后續(xù)提取？這是我們最后一次采樣，希望能盡量用好收集到的材料。

謝謝！

Heather Callahan 博士回覆

您好！根據(jù)去年以來我做的DNA、RNA相關(guān)實(shí)驗(yàn)，給出下面的建議。

這些建議經(jīng)過修改可以用于保存Sterivex unit或者我們的平底過濾膜。

酒精在這種場合起不了作用。經(jīng)驗(yàn)證明，無論用70%或者**酒精，結(jié)果只能使得核酸大量丟失甚至完全降解。

清亮水樣

干凈水樣的濾膜可以干燥后室溫或-20℃冷凍保存在研磨管中（或sterivex unit中）。

冷凍干燥條件下濾膜上的DNA和RNA通常都很穩(wěn)定。使用平的過濾濾膜時(shí)，這么處理是較省事的。因?yàn)?，回到?shí)驗(yàn)室后可直接加入裂解緩沖液進(jìn)行后續(xù)處理，*轉(zhuǎn)移濾膜。對(duì)于使用Sterivex的，可用PowerWater? Sterivex? DNA Isolation Kit，*剪開過濾器取濾膜。

渾濁或者受污染水樣

渾濁或受污染水樣過濾濾膜也可以干燥保存在PowerWater的研磨管中。4℃保存條件下的樣品，得到的DNA完整性比室溫保存的較好。為了獲得高質(zhì)量DNA，短期室溫較多只保存3天，若干燥冷凍可長期保存。

我們也測試了LifeGuard Soil Preservation Solution對(duì)濾膜DNA、RNA的保護(hù)。對(duì)于渾濁樣品，能有效減少核酸降解。加入2-4ml LifeGuard到裝有已過濾水樣濾膜的研磨管中，浸潤濾膜為度。4℃或較低溫度長期保存（＞一周）。

處理使用LifeGurad保存水樣濾膜前，先離心。盡可能吸掉保護(hù)液，避免其過分稀釋裂解緩沖液。另，為了使保護(hù)液盡可能去除，也可以把濾膜與研磨珠分開保存。

含大量金屬離子水樣

有些取自酸性礦洞或者地下洞穴的樣品，腐植酸含量不高，卻有可能含有大量金屬離子。從PowerWater DNA Isolation Kit使用者反饋的信息可了解到，試劑盒所采用的IRT技術(shù)足可以完全去除金屬離子并獲得高質(zhì)量PCR等級(jí)的DNA。

最后

每個(gè)項(xiàng)目具體情況各異，如果你對(duì)手上的樣品了解不多，可聯(lián)系我們。我們會(huì)根據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)給出合適建議。你可以采取不同辦法，看怎么操作較適合你的樣品。

關(guān)于如何選擇過濾膜，請(qǐng)關(guān)注下一篇較新的文章。

 


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