免疫學檢測方法

時間：2022-06-07

免疫學檢測方法是實驗室較常用的檢測方法，從凝集試驗、膠體金到ELISA。未來，隨著檢測方法向高通量、自動化方向發(fā)展，化學發(fā)光法將是大勢所趨！

概括：

化學發(fā)光技術壁壘高的根本原因是：1）被檢測物質濃度低（μg/L—pg/L），導致整個檢測系統(tǒng)的精度要求很高，儀器封閉及試劑系統(tǒng)；2）整個檢測過程步驟多，難以實現(xiàn)自動化；3）包括生物學、化學、物理學、光學等學科在內的多種*技術缺一不可。

國內外主流試劑技術大同小異，主流包括直接化學發(fā)光（異魯米諾（新工業(yè)）、吖啶酯（雅培））、間接（酶促）化學發(fā)光（丹納赫、邁瑞、安圖）、電化學發(fā)光化學（羅氏）等。各有優(yōu)劣，技術較新?lián)Q代趨勢不明顯，但電化學發(fā)光被認為是*三代技術，在技術上略良好。

試劑的性能包括準確度、靈敏度、線性范圍、抗干擾能力、儲存穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、試劑盒規(guī)格等；機器的性能包括檢測速度、試劑位置、樣品位置、儀器尺寸等，準確度是**與認證產(chǎn)品對比得出的；其他性能間接影響精度，需要結合具體項目標準、廠家性能和客戶需求綜合評價。

化學發(fā)光有什么作用？

化學發(fā)光在臨床實踐中得到廣泛應用?；瘜W發(fā)光是一種免疫診斷。它是利用抗原和抗體之間的特異性反應來確定體內疾病標志物的濃度，從而判斷人體的身體狀態(tài)的一種診斷方法。廣泛應用于傳染病、心臟病、**、妊娠檢測等。

有100多個免疫檢測標志物。根據(jù)它們在免疫反應中的作用，標記物可分為抗體和抗原?？乖ù蠓肿涌乖托》肿涌乖?。

化學發(fā)光原理

免疫反應?？乖M入人體，**人體的免疫系統(tǒng)，使其產(chǎn)生免疫反應，稱為免疫反應。免疫反應包括對抗原物質的誘導、反應和作用三個連續(xù)階段。

免疫測定（IA）。在臨床試驗中，根據(jù)抗原與其配對抗體的特異性反應，用已知的抗原或抗體對體液中的抗體或抗原物質進行檢測和分析。

特異性高。抗原-抗體結合基本上僅發(fā)生在抗原的抗原決定簇和抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上的互補關系，抗原抗體反應具有高度的特異性?？乖贵w反應的高特異性是免疫學檢測的基礎。

親和力高?？乖c抗體結合形成抗原抗體復合物的過程是一個動態(tài)平衡，其反應式為：Ag+Ab→Ag·Ab。高親和力抗體的抗原結合位點和抗原的決定簇在空間構型上非常合適，兩者結合牢固，不易解離。

免疫分析技術的發(fā)展：

美國臨床化學會議規(guī)定所有測量光子計數(shù)的方法都是化學發(fā)光法。

化學發(fā)光與ELISA相比的進步：

1.全自動化——機械自動化；

2.定量技術優(yōu)化：利用化學發(fā)光精確計算光子數(shù)——光學；

3.磁粉的應用——材料；

4.抗體標記技術的進展——生物化學。

五種免疫診斷方法比較：化學發(fā)光是趨勢

與其他免疫診斷方法相比，化學發(fā)光法以其在安全性、自動化操作、準確度、速度等方面的系統(tǒng)優(yōu)勢成為免疫診斷的主流。

化學發(fā)光步驟很多。

化學發(fā)光原理解析：以酶法（一步法）為例

按沖洗次數(shù)可分為一步法、二步法、三步法等，四步法；

各組分用量在5~200uL水平；

所有過程都需要在特定溫度下進行；

樣品中與檢測到的抗原/抗體結構相似的物質對結果的影響較大；

磁粉標記-分離技術

磁性顆粒是指表面帶有活性基團的納米級磁性顆粒；

磁性顆?？梢允褂帽砻嫔系幕钚曰鶊F與抗體、抗原和鏈霉親和素連接；

隨著磁粉技術的發(fā)展，板式發(fā)光已基本被取代。

磁粉分離技術特點：

?與微孔板相比，擴大了抗原抗體結合的表面積，增加了抗原或抗體的結合能力，提高了檢測靈敏度。

? 加快反應速度，快速捕獲抗原和抗體。

?易于分離結合相和自由相，提高檢測精度

酶標技術、可追溯性和試劑盒開發(fā)的難點

酶標技術

?抗體/抗原表面有多個活化基團（氨基/羧基），酶與抗體通過這些基團連接稱為酶標；

?酶標簽分為大分子和大分子標簽，大分子和小分子標簽；

?交聯(lián)度對試劑盒的性能有重要影響。

套件的開發(fā)

?多重變量：抗體對的配對、“磁珠”和“酶標”的稀釋度、合適的“配方”溶液、其他試劑盒成分、孵育時間

測試結果的可追溯性

?將開發(fā)的試劑盒的測試結果與對照結果相關聯(lián)

?標準品穩(wěn)定性難

?不同廠家測試結果的**值可能不同

主流化學發(fā)光技術各有千秋

化學發(fā)光的基本原理：由于化學反應（通常為氧化）。

吖啶酯、ALP和HRP發(fā)光系統(tǒng)的原理

電化學發(fā)光原理

各系統(tǒng)優(yōu)缺點對比

五種主流照明技術各有優(yōu)缺點

? 總體而言，五種主流的發(fā)光技術各有優(yōu)缺點。不能說技術優(yōu)劣，但從市場來看，羅氏電化學發(fā)光技術的市場認可度略良好；

? 從國外四位碩士的優(yōu)勢項目對比來看，羅氏（電化學）在**項目中占優(yōu)勢，雅培（吖啶酯）在傳染病項目中占優(yōu)勢，丹納赫（ALP）在甲狀腺激素項目中可以也可以看出，以國外各大廠商為代表的技術并不能占據(jù)**優(yōu)勢；

?相比不同類型技術的差異，國內廠商較看重產(chǎn)品研發(fā)和質量控制能力。

化學發(fā)光試劑的性能評價與比較：

?準確度是評價試劑性能的主要指標。所有指標都體現(xiàn)在是否準確上。但是，因為每個marker都有一定的特異性，客戶不能根據(jù)某個結果是否正確來評價廠家的產(chǎn)品——化學發(fā)光的結果只能作為參考，不能作為金標準；

? 根據(jù)與國外廠商的對比結果判斷國內廠商結果的準確性，線性系數(shù)R2、顯著性水平是重要指標；

? 除了準確度，試劑盒的靈敏度、重復性、線性范圍、抗干擾能力、儲存穩(wěn)定性、開機穩(wěn)定性、包裝體積等20余項參數(shù)都是試劑盒的評價指標。

除了儀器和試劑的性能對比外，裝機容量、單機使用量、項目總數(shù)、項目發(fā)布、三級醫(yī)院使用率等數(shù)據(jù)對于評估廠商產(chǎn)品也很重要，綜合需要評估。

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關鍵詞：紡織品檢測生物降解塑料檢測病毒污染檢測

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詞條說明
【生物降解塑料檢測】生物降解塑料的具體措施
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【紡織品檢測】紡織缺陷檢測
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【紡織品檢測】紡織檢測項目
物理性能（Physical?Property）密度、紗支、克重、紗線捻度、紗線強力、織物結構、織物厚度、線圈長度、織物覆蓋系數(shù)、織物皺縮或織縮率、曲斜變形、拉伸強力、撕裂強力、接縫滑移、接縫強力、粘合強力、單紗強力、紗線的單位線密度強力、防鉤絲、折痕回復角測試、硬挺度測試、拒水性測試、防漏性、彈性及回復力、透氣性、透水汽性能、一般成衣燃燒性、兒童晚服燃燒性、脹破強力、耐磨性測試、抗起毛起
紡織品微生物——抗菌性能檢測
人出世到這一全世界，就與病菌結上了深厚感情。病菌不但日常生活在人們周邊的條件中，仍在大家身體內蟄居、繁育。在通常情況下，身體除開人體器官內部及其毛細血管和淋巴系統(tǒng)外，其他位置(如肌膚、呼吸系統(tǒng)、消化道和生殖系統(tǒng)泌尿系統(tǒng)等)的對外開放“系統(tǒng)結構”都是有病菌存有。一切正常有益菌與病原菌群并沒有實質上的差別。**一種只不過是被**世界“一切正?！钡膹V告牌，事實上卻在隱敝地、漫性地腐蝕身體。遮蓋身體表層的