能夠阻止血液凝固的化學(xué)試劑或物質(zhì),稱為抗凝劑或抗凝物質(zhì),如**抗凝劑(肝素,水蛭素等)、Ca2+鰲合劑(檸檬酸,)。一般常用的抗凝劑有肝素、乙二胺四鹽(EDTA鹽)、枸櫞酸鹽、草酸鹽等4種, 實(shí)際應(yīng)用中要根據(jù)不同的需要進(jìn)行選擇,才能獲得理想的效果。下面德晟整理了它們的應(yīng)用特點(diǎn)分述如下:
一、肝素
肝素是用于血液化學(xué)成分檢測(cè)的可以選擇抗凝劑。肝素是一種含有酸基團(tuán)的粘多糖,是分散相物質(zhì)平均分子質(zhì)量為15000。其抗凝原理主要是通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合引起抗凝血酶Ⅲ構(gòu)型發(fā)生變化,加速凝血酶-凝血酶復(fù)合體形成而產(chǎn)生抗凝作用。此外,肝素還能借助血漿輔助因子(肝素輔助因子Ⅱ)來(lái)抑制凝血酶。常用肝素抗凝劑是肝素的、、、銨鹽,其中以肝素較好,但其價(jià)格較貴,、鹽會(huì)增加血液中的、含量,銨鹽會(huì)增加尿素氮的含量。通常用肝素抗凝的劑量為10.0~12.5 IU/ml血液。
肝素對(duì)血液成分干擾較少,不影響紅細(xì)胞體積,不引起溶血,適用于做紅細(xì)胞滲透性試驗(yàn)、血?dú)狻⒀獫{滲透量、紅細(xì)胞壓積及普通生化測(cè)定。但肝素具有抗凝血酶作用,不適合做血凝試驗(yàn)。另外,肝素過(guò)量可引起白細(xì)胞聚集和血小板減少,所以不適合做白細(xì)胞分類和血小板計(jì)數(shù),較不能用于止血檢驗(yàn)。此外,肝素抗凝血不能用于制作血涂片,因?yàn)?/span>Wright染色后出現(xiàn)深藍(lán)色背景,影響顯微鏡減產(chǎn)。肝素抗凝血應(yīng)于短時(shí)間內(nèi)使用,否則放置過(guò)久血液又可凝固。
二、乙二胺四鹽(EDTA鹽)
EDTA能與血液中Ca2+結(jié)合成螯合物,凝血過(guò)程被阻斷,血液不能發(fā)生凝固。EDTA鹽有、、鹽,**血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化**推薦使用的是EDTA-K2,其溶解度較高,抗凝速度較快。EDTA鹽通常配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)是15%的水溶液,每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。EDTA鹽可在100℃下干燥,抗凝作用不變。
此抗凝劑不影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)及大小,對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)影響較小,并且可以抑制血小板的聚集,適用于一般血液學(xué)檢測(cè)。但如果抗凝劑濃度過(guò)高,滲透壓上升,會(huì)造成細(xì)胞皺縮。EDTA溶液pH與鹽類關(guān)系較大,低pH可使細(xì)胞膨脹。EDTA-K2可使紅細(xì)胞體積輕度膨脹,采血后短時(shí)間內(nèi)平均血小板體積非常不穩(wěn)定半小時(shí)后趨于穩(wěn)定。EDTA-K2使 Ca2+、Mg2+下降,同時(shí)使肌酸激酶、堿性酶降低,EDTA-K2的較佳濃度為1.5mg/ml血液,如果血少,中性粒細(xì)胞會(huì)腫脹分葉消失,血小板會(huì)腫脹、崩解,產(chǎn)生正常血小板的碎片,使分析結(jié)果產(chǎn)生錯(cuò)誤。EDTA由于能抑制或干涉纖維蛋白凝塊形成時(shí)纖維蛋白單體的聚合,不適于血凝和血小板功能檢測(cè),也不適用于鈣、、及含氮物質(zhì)的測(cè)定。此外EDTA能影響某些酶的活性和抑制紅斑狼瘡因子,故不適合制作組化染色和檢查紅斑狼瘡細(xì)胞的血涂片。
三、枸櫞酸鹽
枸櫞酸鹽主要是枸櫞酸,其抗凝原理是能與血液中的Ca2+結(jié)合形成螯合物,使Ca2+失去凝血功能,凝血過(guò)程被阻斷,從而阻止血液凝固。枸櫞酸有Na3C6H5O7·2H2O和2Na3C6H5O7·11H2O兩種晶體,通常用前者配成3.8%或3.2%的水溶液,與血液按照1:9體積混合。
大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸抗凝,它有助于Ⅴ因子和Ⅷ因子的穩(wěn)定,并且對(duì)平均血小板體積及其他凝血因子影響較小,可用于血小板功能分析。枸櫞酸細(xì)胞毒性較小,也是輸血中血液保養(yǎng)液的成分之一。但是,枸櫞酸6mg才能抗凝1ml血液,堿性強(qiáng),不適用于血液化驗(yàn)和生化測(cè)驗(yàn)。
四、草酸鹽
草酸鹽也是常用的抗凝劑,優(yōu)點(diǎn)是溶解度大,其作用原理是溶解后解離的草酸根與標(biāo)本中的Ca2+形成草酸鈣沉淀,使Ca2+失去凝血功能,凝血過(guò)程被阻斷。常用的草酸鹽抗凝劑種類有草酸、草酸和草酸銨,草酸的常用濃度為O.1 mol/L,與血液按1:9比例使用。但是高濃度k+或Na+易使血細(xì)胞脫水皺縮,而草酸銨則可使血細(xì)胞膨脹,故測(cè)定血細(xì)胞比容時(shí)用草酸銨與草酸或草酸兩者適當(dāng)比例混合的抗凝劑,恰好不影響紅細(xì)胞的形態(tài)和體積。常用于血液生化測(cè)定,但不適用于K+、Ca 2+的測(cè)定。由于生成草酸鈣沉淀,紅細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)鋸齒狀,白細(xì)胞出現(xiàn)空泡,淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞會(huì)變形,不宜做血片檢查。草酸鹽可使血小板聚集,并影響白細(xì)胞形態(tài),不能用于白細(xì)胞和血小板分類計(jì)數(shù)。
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詞條
詞條說(shuō)明
酯(NSP-SA-NHS)蛋白標(biāo)記的發(fā)光染料配置說(shuō)明
酯(NSP-SA-NHS)Cas199293-83-9及其相關(guān)化合物已被證明是非常有優(yōu)勢(shì)的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物,其穩(wěn)定性、活性和敏感性**過(guò)了某些放射性同位素。酯能與含有一級(jí)氨基的蛋白發(fā)生反應(yīng)。在堿性條件下,NHS作為離去基團(tuán)被取代,蛋白質(zhì)與酯形成穩(wěn)定的酰胺鍵。反應(yīng)完成后,多余的鹽通過(guò)脫鹽柱除去。在存在堿性時(shí),標(biāo)記的蛋白不需要酶催化可自行發(fā)光。具體發(fā)光原理是在堿性溶液中
? Tris飽和為淺黃色透明液體,下層為相,,上層為Tris 緩沖液pH>7.8,是用Tris-HCl(pH8.0)飽和過(guò)的重蒸,有刺激性氣味,內(nèi)加有抗氧化的8-羥基。Tris飽和用于分離DNA。? Tris飽和的配置:冰箱取出重蒸,室溫放置,之后68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中,以防玻璃炸裂,加8-羥基至0.1%和β-巰基至0.2%
吖啶酯在發(fā)光試劑中的優(yōu)越感來(lái)自哪里
吖啶酯是一類重要的化學(xué)發(fā)光試劑,具有較高的**產(chǎn)率,其化學(xué)發(fā)光效率較高,作為化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物發(fā)光體系簡(jiǎn)單,自然本底低,受干擾少,信噪比較高;用作化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物時(shí),除具有上述優(yōu)點(diǎn)外還易于偶聯(lián)、標(biāo)記簡(jiǎn)單且穩(wěn)定性好、標(biāo)記后對(duì)其發(fā)光性能影響少,在**和過(guò)氧化氫的存在下即可發(fā)光。在氧化反應(yīng)過(guò)程中,結(jié)合物被分解,不影響游離吖啶酯的發(fā)光;另外,吖啶酯類化學(xué)發(fā)光試劑具有較好的穩(wěn)定性,易于儲(chǔ)存。根據(jù)取代基的不同,
卡波姆940為白色,疏松狀;具酸性、吸濕性和微有特殊臭味,能溶于水、、甘油。常用濃度為0.1%~3.0%??ú?40其分子中含大量羧基,故水溶液應(yīng)特別注意用堿中和后使用,以減少對(duì)皮膚、粘膜的刺激。卡波940的中和劑可用、、碳酸、硼砂、氨基酸類、極性**胺類如三胺。月桂胺和硬脂胺可在非極性系統(tǒng)中作中和劑。中和后的卡波姆水凝膠在pH6~11之間較粘稠,如pH<3或pH>1
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