磁珠法血液DNA/RNA的高通量提取

時間：2014-12-19

作者：深圳市安必勝科技有限公司

作者：Michelle Tetreault Carlson 來源：美國MoBio實驗室【字號：大中小】

兩個吸血鬼走進酒吧并叫來酒保

"給我來杯血"，一個吸血鬼說。

"給我來杯血漿"，另一個吸血鬼說。

"好的"酒保回答，"一杯血和一杯軟血（Blood lite）！"

(此處應該有笑聲)

是的，我們在慶祝一個恐怖的季節(jié)，同時，也在此發(fā)布我們的新產品PowerMag Blood DNA/RNA Isolation kit。

血液：里面有什么？

血液中含有血漿、紅細胞、白細胞和血小板，它是非常*特的一種樣品，因為血液中的核酸非常豐富，這座基因金礦被掩埋在各種的細胞碎片和蛋白混合物中，這些污染物會影響下游的PCR反應或測序，尤其是紅細胞里的血紅蛋白，它是影響DNA/RNA純度和抑制PCR反應的主要元兇。

血液的采集和保存

應該用抗凝管采集血液，否則血液凝集并把攜帶DNA/RNA的細胞都包埋起來。。常見準的血液采集管會使用EDTA或檸檬酸鹽抗凝。這兩種物質都不會干擾下游的基因分析。肝素也能抗凝，但它容易吸附DNA，所以不推薦。

如果不能馬上處理，用于DNA提取的全血可以在4度較長保存2個星期，用于RNA提取的較長不**過2個小時。如果需要保存較長時間，則要做一些特殊處理了。如果只需要DNA，你可以將血液分裝成小份(250-500 μL)置于-20oC 或-80oC 長時間保存。若要提取血液中的RNA，就需要當心了。RNA酶是一種很頑強的酶，即便在冷凍狀態(tài)下仍能發(fā)揮作用，如果不能馬上處理樣本，我們建議將血樣置于到RNA穩(wěn)定液中，比如PAXgene?血液RNA管。在這些管子里頭，胞RNA在18°C到25°C可穩(wěn)定保存3天，2°C到8°C可保存5天。

另一方面，如果RNA中途要暫停，可把分離、裂解、凍存步驟沉淀的白細胞置于RNA酶抑制緩沖液中。例如，沉淀的白細胞可以置于PowerMag? Blood DNA/RNA Isolation kit所帶的PowerMag? 白細胞裂解液中，-20oC 或 -80oC保存，當你做好提取準備時，將樣品取出放在室溫，照接下來的步驟操作即可。

從血液中獲得DNA或RNA

在PowerMag Blood DNA/RNA Isolation kit 中，利用了哺乳動物血液中，基因組DNA(gDNA)只存在于白細胞中，紅細胞和血小板中沒有核酸所以不含gDNA（禽類紅細胞例外）的特性，紅細胞或白細胞靠緩沖液來裂解。一般來講，1ml人血中白細胞的平均數(shù)大概7，000，000個。

操作的第一步是用低滲緩沖液選擇性的裂解紅細胞。然后沉淀白細胞，去除上清中含有亞鐵血紅素的紅細胞。。往白細胞沉淀中加入裂解緩沖液以釋放核酸，像上面說到的，如果要提取RNA而又不能立馬處理，此處是可以將其放在(-20℃ 或-80 ℃)長期保存的時機，接下來使用ClearMag? 磁珠特異性捕獲核酸，去除雜質，再洗滌核酸，最后洗脫的核酸可直接用于下游反應。

RNA和DNA的平均得率？

沒有兩個血液樣本是一樣的。白細胞數(shù)量的不同會影響到提取的核酸的量，而白細胞數(shù)量會受采樣時宿主的健康狀況影響。不同種屬動物血液的核酸提**率也不一樣。然而，每200ml MO BIO員工全血的DNA和RNA平均提**率分別是3mg和1mg。

高分子量的核酸

如果你要用高通量的方法從血液中提取高分子量的核酸，這款試劑盒再合適不過了！我們已經用這款試劑盒提取到了高達100kb的DNA片段，如果你在尋找那些含量不高但片段很長的靶DNA以用于測序，使用這款血液試劑盒吧！

說了這么多，實在餓了，我較好回到餐桌那去，我的水和大蒜們都在等我呢，萬圣節(jié)后見！

參考文獻：

1. Yokota M, Tatsumi N, Nathalang O, Yamada T, Tsuda I. (1999). "Effects of Heparin on Polymerase Chain Reaction for Blood White Cells". J. Clin. Lab. Anal. 13: 133–140.

2. DNA isolation by a rapid method from human blood samples: effects of MgCl2, EDTA, storage time, and temperature on DNA yield and quality. Lahiri DK1, Schnabel B. Biochem Genet. 1993 Aug;31(7-8):321-8.

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