百螢問號(hào)之活性氧ROS Brite 570適用儀器有哪些

時(shí)間：2024-09-04作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：8

1.活性氧ROS Brite 570概述

 

活性氧(ROS)是以化學(xué)方法反應(yīng)的包含活性氧原子的化合物。例如：氧化物、含有羥基自由基、單線態(tài)氧和過氧化物的衍生物。 ROS具有很高的活性，因?yàn)榇嬖谖磁鋵Φ膬r(jià)電子層單電子。 ROS是生物氧代謝自然形成的副產(chǎn)物，它在細(xì)胞信號(hào)傳遞和體內(nèi)平衡方面扮演著重要角色。然而在一些環(huán)境情況下（如紫外線照射或者高溫環(huán)境下），ROS水平將大幅度增加。這可能導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重大傷害，日積月累,這被稱為氧化應(yīng)激。外部來源也生成ROS ，如電磁輻射。在氧化應(yīng)激條件下，活性氧產(chǎn)量大幅度增加， 導(dǎo)致細(xì)胞膜脂、蛋白質(zhì)和核酸的逐漸破壞。這些生物分子的氧化性損傷是與衰老和各種疾病緊密相關(guān)，例如動(dòng)脈粥樣硬化、致癌性、缺血性、神經(jīng)衰退性疾病。 ROS Brite 570試劑是用以測量細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平的新型熒光分子探針，可以被常用的熒光顯微鏡高分辨率、微型板塊熒光測量 或者流式細(xì)胞儀成像。細(xì)胞滲透性  ROS Brite 570試劑是沒有熒光的，在與活性氧反應(yīng)產(chǎn)生明亮的近紅外熒光 。因此該試劑可以用常用的熒光顯微鏡高分辨率、微型板塊熒光測量 或者流式細(xì)胞儀成像通過測量熒光信號(hào)來測量細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平。




圖1.ROS Brite 570 對 PBS 緩沖液（pH 7.2）中不同活性氧物質(zhì)的熒光響應(yīng)。熒光強(qiáng)度用 Ex/Em = 540/590 nm 測量




2.活性氧ROS Brite 570適用儀器

 

熒光顯微鏡

Ex:   Cy3/TRITC濾波片組

Em:   Cy3/TRITC濾波片組

孔板:  黑色透明底板

濾波片組:  Cy3/TRITC濾波片組

 

3.活性氧ROS Brite 570實(shí)驗(yàn)方案

 

樣品操作及實(shí)驗(yàn)分析

1）在DMSO中準(zhǔn)備10至20 mM ROS Brite 儲(chǔ)備溶液。 通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）將DMSO儲(chǔ)備溶液稀釋到Hanks溶液中，制成5至10 μM的工作溶液。

2）根據(jù)需要處理細(xì)胞（例如，使用50-100 nM血管緊張素II處理RASM細(xì)胞3-5小時(shí)）。

3）將細(xì)胞與ROS Brite （5-10 μM，來自步驟＃1）在37oC下孵育15 -30分鐘。

注意：所使用的ROS Brite 的濃度隨細(xì)胞系的不同而不同，需要測試不同的濃度才能獲得佳劑量。 對于cat＃16053，可能使用的濃度較低，例如0.5-5 uM。

4）用HHBS緩沖液代替染料加載溶液。

5）用適當(dāng)?shù)臒晒鈨x器（例如熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或體內(nèi)成像儀器）分析細(xì)胞。




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