Enzymatics T4 DNA連接酶（快速）秋爽價(jià)促銷

時間：2015-08-13作者：廣州勝創(chuàng)生物科技有限公司瀏覽：135

	勝創(chuàng)生物秋爽價(jià)震撼來襲！


	                                                       活動時間：8月15日-9月24日


	T4 DNA連接酶（快速）


	



	
	
		產(chǎn)品描述
T4 DNA連接酶催化雙螺旋DNA或RNA的5′末端基團(tuán)和3′羥基末端基團(tuán)之間形成二酯鍵。該酶能夠有效的連接平末端和黏性末端，同時修復(fù)雙螺旋DNA、RNA或DNA/RNA雜交鏈中的單鏈缺口。

蛋白來源
攜帶克隆的T4 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。
組成成分：
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C
隨酶提供：
B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)
2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C
10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C

單位定義
1 unit 被定義為23°C下、30分鐘內(nèi)，在50 μl 1X T4 DNA連接酶緩沖液中能夠連接50%的具有粘性末端的100 ng DNA片段的DNA連接酶量。

產(chǎn)品信息
T4 DNA Ligase (Rapid)
Part Number  L6030-HC-F
Concentration  600,000 U/ml
Unit Size            26,000 U
SDS          Available on request


產(chǎn)品要點(diǎn)：
T4 DNA連接酶是ATP依賴的酶。建議舍棄在-20°C儲存一年的反應(yīng)緩沖液，用新鮮的緩沖液代替以確保較大性能。當(dāng)把一個嵌入物當(dāng)做目標(biāo)靶物：矢量比在2到6之間時，單個嵌入的連接反應(yīng)是較佳的。6:1以上的比率將會促進(jìn)多重片段的嵌入，當(dāng)下降到2:1比率時，將會降低連接效率。
對于有疑問的連接反應(yīng)或如果DNA濃度是未知的，那就有必要將比率多樣化并進(jìn)行多重連接反應(yīng)。
高濃度的PEG將會顯著的降低電能細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。為了將電能細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較大化，下面給出寫推薦的方法：
較好的：在接下來的連接反應(yīng)中，利用DNA凈化吸附柱來凈化產(chǎn)物，并用50uL的TE洗提。DNA即準(zhǔn)備轉(zhuǎn)化。DNA較終被轉(zhuǎn)化的量應(yīng)該在0.1-10 ng的范圍之間。
較好的：在ddH20 或TE中稀釋連接產(chǎn)物將會降低PEG濃度。DNA較終被轉(zhuǎn)化的量應(yīng)該在0.1-10 ng的范圍之間。
高濃度的T4 DNA連接酶與2X快速連接緩沖液相結(jié)合能夠顯著提高平末端連接的速度和效率，因此不建議有較長的潛伏期（>10分鐘），因?yàn)殚L的潛伏期能夠顯著的降低連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。為了將正確嵌入或矢量結(jié)合的轉(zhuǎn)化效率較大化，建議使用下面的方案。
酶的10X T4 DNA連接酶緩沖液不包含PEG，并與標(biāo)準(zhǔn)連接反應(yīng)方案一致，該方案并沒*利用快速的緩沖區(qū)規(guī)格。

操作說明：
反應(yīng)體系:
體積                   組分                                 終濃度
10 μL      2X Rapid Ligation Buffer              1X
X μL                Vector                                1-10 ng/μL
X μL               Insert                                      1-10 ng/μL
1 μL        T4 DNA Ligase (600 U/ μL)          30 U/μL
X μL            Type I Water                              N/A
20 μL                                                           總體積
加入以上所有成分于反應(yīng)管中，吹打混勻，25℃，10min孵育，立即使用PCR洗脫柱進(jìn)行DNA的純化，洗脫于50ulTE或雙蒸水存儲或者直接進(jìn)行稀釋（稀釋比例至少1：10）并進(jìn)行轉(zhuǎn)化，將0.1-10ng 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入相應(yīng)載體的電轉(zhuǎn)或鈣轉(zhuǎn)的感受態(tài)細(xì)胞中。

參考文獻(xiàn)
Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982) P.D. Boyer (Eds.), The Enzymes, 5, pp. 3. San Diego: Academic Press.

適用范圍
該產(chǎn)品被研制、生產(chǎn)加工及銷售，僅用于體外，不適用于人類和動物注射。
	
	
		 
	
	
		
			
				
					
						產(chǎn)品名稱
					
				
				
					
						產(chǎn)品貨號
					
				
				
					
						規(guī)格
					
				
				
					
						目錄價(jià)
					
				
				
					
						秋爽價(jià)！
					
				
			
			
				
					
						T4 DNA連接酶（快速）
					
				
				
					
						L6030-HC-F
					
				
				
					
						26000 U
					
				
				
					
						1074元
					
				
				
					
						720元
					
				
			
			
				
					
						L6030-HC-L
					
				
				
					
						240000 U
					
				
				
					
						6514元
					
				
				
					
						4430元
					
				
			
		
	
	
		 
	
	
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