HPLC常見峰形及異常情況

時(shí)間：2024-01-11作者：廣州市展恩化工有限公司瀏覽：89

一、HPLC全稱高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography),是一種快速的分離分析技術(shù)。HPLC具有高效、高速、高靈敏度、適用范圍廣和流動(dòng)相選擇范圍廣等特點(diǎn),因而發(fā)展迅速,并在醫(yī)藥、食品、化妝品和農(nóng)藥等很多行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。

二、HPLC峰形

HPLC分析過程中,由于各種原因,經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些異常峰形,嚴(yán)重影響對(duì)結(jié)果的分析,給實(shí)驗(yàn)人員帶來很大的困擾。下面介紹一些常見的峰形以及可能的原因:

1. 未出峰

可能的原因:

a. 未成功進(jìn)樣,或樣品未溶解進(jìn)溶劑中,或樣品分解變質(zhì)或樣品濃度太低;

b. 儀器本身的問題:泵或者檢測(cè)器故障;

c. 流動(dòng)相選擇不合適,如對(duì)于反相硅膠柱來說,若流動(dòng)相極性太大,是沖不下來一些小極性的物質(zhì)的,物質(zhì)一直保留在柱子中,因而不出峰。

d. 檢測(cè)器不合適,如:有些產(chǎn)品沒有紫外吸收或者吸收很弱,但是檢測(cè)還使用了UV檢測(cè)器2.平頭峰

可能的原因:

a. 樣品濃度過大或進(jìn)樣體積太大,這個(gè)也是大多數(shù)原因

b. 檢測(cè)器設(shè)置不正確

可能的原因:

a. 流動(dòng)相吸收本底值過高

b. 進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣

c. 樣品組分的吸收**流動(dòng)相

d. 配制樣品的溶劑與流動(dòng)相不一致4.肩峰

可能的原因:

a. 進(jìn)樣量過大;樣品濃度過高

b. 保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效

d. 色譜柱柱頭塌陷

5.裂峰

可能的原因:

a. 溶劑效應(yīng):溶解樣品用的溶劑和起始流動(dòng)相極性相差太大

b. 保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效

d. 色譜柱柱頭塌陷

6.鬼峰

鬼峰(ghost peak)是在某個(gè)譜圖里出現(xiàn),可能同樣的條件再做一次又不出現(xiàn)了,時(shí)有時(shí)無的峰。

可能的原因:

a. 進(jìn)樣閥殘余峰,在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來平衡和清洗系統(tǒng)

b. 樣品中存在未知物,改進(jìn)樣品的預(yù)處理

c. 流動(dòng)相污染,更換新流動(dòng)相(或者換品牌);盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用,隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過濾

d. 流路中有小的氣泡,打開Purge閥,加大流速排除7. 前伸峰

可能的原因:

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高

b. 溶解樣品的溶劑比流動(dòng)相極性強(qiáng)

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效

d. 流動(dòng)相不合適,更換新流動(dòng)相(調(diào)pH或換種類、比例等)

8. 拖尾峰

可能的原因:

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高

b. 流動(dòng)相不合適,更換新流動(dòng)相(調(diào)pH或換種類、比例等)

c. 硅羥基作用:加入三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值,鈍化樣品

d. 柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品

e. 色譜柱柱頭塌陷或柱效下降:更換色譜柱

注:除以上異常峰形外,HPLC檢測(cè)過程中,還有很多其它情況,小伙伴們可以從儀器本身、流動(dòng)相、固定相(色譜柱)、柱溫和等度與梯度方法學(xué)等方面,調(diào)整參數(shù),較終找到一種較合適的HPLC方法。


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