HEPES 緩沖劑在細(xì)胞培養(yǎng)中的優(yōu)勢

           HEPES4-羥乙基哌嗪乙磺酸)是一種氫離子緩沖劑,pH值緩沖范圍:6.8-8.2。我們在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。它是一種弱酸,在開放式的培養(yǎng)條件中,若加入HEPES,可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高,從而將PH維持在7.0左右。HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L,對細(xì)胞無毒性作用。一般情況下,濃度為20mmol/LHEPES即可達(dá)到緩沖能力。既然我們常用于細(xì)胞培養(yǎng)液中,那它在細(xì)胞培養(yǎng)液中有哪些優(yōu)勢呢?

    1. 大多數(shù)細(xì)胞所需pH 7.2-7.4,但細(xì)胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同,成纖維細(xì)胞喜歡較高pH7.4-7.7),而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH7.0-7.4)。HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH7.2-7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。其優(yōu)點是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時能維持較恒定的PH值,在這種培養(yǎng)條件下,細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。

    2. 利用HCO3 CO2緩沖對的培養(yǎng)液 pH值不穩(wěn)定,儲存一定時間后容易偏堿。如果培養(yǎng)液的 PH變化太快,就可以在培養(yǎng)液中加 HEPES緩沖液至10--25mM的終濃度;它可以長時間保持恒定的PH,為細(xì)胞培養(yǎng)者們所喜愛。

    3. HEPES與其他緩沖劑相比,它的分解常數(shù)隨溫度變化不大,這使HEPES緩沖液成為在低溫時可較好地保持酶的結(jié)構(gòu)和功能的緩沖液。

    但值得我們注意的是,當(dāng)HEPES暴露于光線中時,會產(chǎn)生H2O2,這對培養(yǎng)的細(xì)胞或其它有生物活性的物體產(chǎn)生毒性,因此HEPES作為緩沖液的操作應(yīng)盡量在避光條件下進(jìn)行。

    德晟生產(chǎn)的HEPES為白色晶體粉末,主含量≥99.50%,鐵離子≤5ppm,硫酸鹽≤0.05%,重金屬殘留(Pb)10ppm。可提供試用樣品粉末,自行配置成溶液進(jìn)行檢測使用。


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