細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中,細(xì)胞計(jì)數(shù)是一項(xiàng)基本功,對于標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)條件以及需要定量的實(shí)驗(yàn)來說都關(guān)鍵。這里介紹使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的經(jīng)典方法以及中間一些需要注意的細(xì)節(jié)。
制備細(xì)胞懸液:
對于貼壁生長的細(xì)胞,我們需要使用胰酶消化的方法使細(xì)胞從培養(yǎng)皿表面脫落
根據(jù)需要加入合適體積的培養(yǎng)基,將細(xì)胞進(jìn)行中和及稀釋,以得到均質(zhì)的細(xì)胞懸液。要求盡可能將細(xì)胞吹打散開,不要?dú)埩羧魏渭?xì)胞團(tuán)
準(zhǔn)備血細(xì)胞計(jì)數(shù)器:
使用70%乙醇將蓋玻片和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器清潔干凈
將將蓋玻片潤濕(使用水或呼一口氣,目的是使蓋玻片與血細(xì)胞計(jì)數(shù)器接觸較緊密,易于粘連),并覆蓋至血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上
臺盼蘭染色(可選):
如果需要計(jì)算細(xì)胞的活力,則需要將細(xì)胞懸液和0.4%臺盼蘭等體積混合
室溫孵育3-5分鐘,使臺盼蘭進(jìn)入死細(xì)胞,使死細(xì)胞著藍(lán)色
血細(xì)胞計(jì)數(shù)器加樣:
使用吸管將細(xì)胞懸液或細(xì)胞/臺盼蘭混合液滴加到血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)池的邊緣。此時液滴將在虹吸的作用下進(jìn)入蓋玻片下方的計(jì)數(shù)池
以同樣的方式在另一側(cè)的計(jì)數(shù)池中也加入細(xì)胞懸液
將計(jì)數(shù)板放置幾分鐘使細(xì)胞擴(kuò)散,同時用吸水紙吸除多余的液體
細(xì)胞計(jì)數(shù):
在100倍顯微鏡下,移動計(jì)數(shù)板將視野對準(zhǔn)計(jì)數(shù)板的*大方塊,該方塊四周有一圈3條平行線包圍,中間有密集的網(wǎng)格。*方塊區(qū)差不多剛好可以填滿整個視野
使用手持式計(jì)數(shù)器記錄計(jì)數(shù)池四個角以及*方塊內(nèi)的細(xì)胞數(shù)(1-5號位置,經(jīng)典的current-protocol推薦每個方塊細(xì)胞數(shù)應(yīng)不大于20-50),并重復(fù)記錄另一側(cè)計(jì)數(shù)池中的細(xì)胞數(shù),總計(jì)十個方塊。計(jì)數(shù)的方法是只計(jì)算上邊和左邊壓線的細(xì)胞,而右邊和下邊壓線的細(xì)胞不予計(jì)算(下圖,總體原則是“計(jì)上不計(jì)下,計(jì)左不計(jì)右”,判斷標(biāo)準(zhǔn)為是否接觸三條邊線的中間線)。如果有多個細(xì)胞沒有吹散成團(tuán)存在,此時只可記為一個細(xì)胞。如果團(tuán)塊很多,則可能需要重新吹打甚至消化直至絕大多數(shù)細(xì)胞為單個細(xì)胞
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詞條
詞條說明
使用石墨為加熱體,控溫精度可至±0.2℃注。溫度均勻,各消解孔間溫差可至±1.5℃注,保證消解的一致性。等靜壓石墨板塊阻止強(qiáng)腐蝕性物的侵蝕,從而保證其長的使用壽命。整體結(jié)構(gòu)采用防腐蝕設(shè)計(jì),適應(yīng)各種惡劣環(huán)境??垢g的特性減小了樣品污染。消解時間長短依據(jù)樣品種類和處理方法自由設(shè)定。可編輯十個加熱升溫工步,每個工步中可設(shè)置升溫時間和保持時間,靈活配置處理難消解的樣品。并做成方法庫,方便維護(hù)。控制溫度從室
水浴恒溫振蕩器采用電磁振蕩原理,類似電磁爐原理,是通過電子線路板組成部分產(chǎn)生交變磁場、不銹鋼材質(zhì)容器即切割交變磁力線而產(chǎn)生交變的電流(即渦流),渦流使容器壁鐵分子高速無規(guī)則運(yùn)動,分子互相碰撞、摩擦而產(chǎn)生熱能,同時由于渦流存在,水分子受電磁力作用,帶動玻璃容器內(nèi)液體運(yùn)動,達(dá)到震蕩的效果。? ? ??水浴恒溫振蕩器,又稱水浴恒溫?fù)u床,該系列產(chǎn)品溫度控制采用智能系
河南科技大學(xué)(Henan University of Science and Technology)簡稱河科大(HAUST),坐落于“千年**,牡丹花城”、中原城市群副中心城市—洛陽,是科工局與河南省人民共建高校,省屬大學(xué),河南省建設(shè)的三所綜合性大學(xué)之一,位列中西部高?;A(chǔ)能力建設(shè)工程、工程師教育培養(yǎng)計(jì)劃、醫(yī)生教育培養(yǎng)計(jì)劃、農(nóng)林人才教育培養(yǎng)計(jì)劃,入選全國深化創(chuàng)業(yè)教育改革高校、級技術(shù)人員繼續(xù)教育基地
實(shí)驗(yàn)室設(shè)備中,對潔凈工作臺的使用要求較高,所以有一些重要的使用注意事項(xiàng),小編就為大家來普及有關(guān)潔凈工作臺的一些要點(diǎn),其實(shí)在實(shí)驗(yàn)室里方方面面都需要我們注意,稍不注意就為威脅生命,所以我們要高度重視起來。一、基本安全事項(xiàng)1、 本產(chǎn)品屬室內(nèi)適用型,請不要在室外使用。勿置于高速塵源和震源處。2、 本產(chǎn)品不具有防爆能力,嚴(yán)禁在危險(xiǎn)的環(huán)境中使用。并禁止在多時多濕、結(jié)露、多塵以及有油煙、霧氣的場所使用。3、 請
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