PCR實(shí)驗(yàn)室污染了怎么處理


    出現(xiàn)污染后,我們首先考慮可能是試劑的污染,更換新批號的HBV試劑重新檢測后,結(jié)果仍為全部標(biāo)本陽性。

    將HBV標(biāo)本拿到其他正規(guī)的PCR實(shí)驗(yàn)室檢測,結(jié)果標(biāo)本中陰、陽性結(jié)果都有,陰性對照是陰性,陽性對照是陽性,說明標(biāo)本沒有被污染將兩種批號的HBV試劑拿到其他正規(guī)的PCR實(shí)驗(yàn)室檢測,也顯示試劑沒有問題。
    我實(shí)驗(yàn)室用消毒液擦拭工作臺面后,打開所有的紫外燈照射一天,將所使用微量進(jìn)樣器、離心管、槍頭、手套、記號筆、記錄本等都更換掉,再將HBV標(biāo)本進(jìn)行檢測,結(jié)果全部標(biāo)本仍然為陽性。
    用消毒液擦拭工作臺面后,打開所有的紫外燈照射一天,將HBV標(biāo)本重新檢測,同時(shí)設(shè)置了兩個(gè)陰性對照(A和B),A 陰性對照為將試劑的反應(yīng)管從試劑盒中拿,打開反應(yīng)管的蓋子,在空氣中暴露10 min,蓋上蓋子,上機(jī)檢測;B陰性對照為將試劑的反應(yīng)管從試劑盒中拿,不開蓋子,直接上機(jī)檢測。結(jié)果是全部標(biāo)本和A陰性對照為陽性,而B陰性對照為陰性。
    至此,雖然還查找不到污染源是什么,但有一點(diǎn)可以肯定,PCR實(shí)驗(yàn)室污染是氣溶膠擴(kuò)散而引起的后來經(jīng)過調(diào)查,發(fā)現(xiàn)污染是由于本室工一位工作人員在打掃實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生時(shí),用擴(kuò)增區(qū)的掃笤和拖把打掃了標(biāo)本制備區(qū)的衛(wèi)生引起。
    在確定了污染的原因后,我們就開始著手排除污染,每天都打開整個(gè)PCR 實(shí)驗(yàn)室的門窗和排氣扇,讓整個(gè)實(shí)驗(yàn)室通風(fēng),用消毒液擦拭整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)室,打開所有的紫外燈照射。
    每隔3 d按3.5步驟檢測一次,一直這樣處理了一個(gè)月,A陰性對照才轉(zhuǎn)為陰性。連續(xù)檢測三次A和B陰性對照,每次結(jié)果都均為陰性,才確定PCR實(shí)驗(yàn)室恢復(fù)正常。

    通常我們對PCR實(shí)驗(yàn)室污染的預(yù)防是采取隔離不同操作區(qū)、分裝試劑、改進(jìn)實(shí)驗(yàn)操作等規(guī)則,對污染的處理是用稀鹽酸擦拭或浸泡;紫外線照射法等 ]。而對于實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)方面沒有給予足夠的重視,為了防止實(shí)驗(yàn)區(qū)間之間的相互污染,各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)間都是盡可能的密閉,從而使得實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)PCR產(chǎn)物殘留污染的幾率增大。從本次PCR實(shí)驗(yàn)室污染排除的過程來看.我覺得污染得以排除的一個(gè)關(guān)鍵是通風(fēng)。適當(dāng)?shù)慕o予實(shí)驗(yàn)室通風(fēng),可起到空氣稀釋的作用,有利于PCR產(chǎn)物殘留量的減少,加快實(shí)驗(yàn)室污染的排除。


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