天津本生—PCR技術(shù)原理、實驗步驟和應(yīng)用

時間：2020-12-14作者：本生（天津）健康科技有限公司瀏覽：81

　　天津本生—PCR技術(shù)原理、實驗步驟和應(yīng)用

　　一、實驗?zāi)康?

　　1.掌握聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的原理。

　　2.掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術(shù)。

　　二、實驗原理

　　PCR技術(shù)，即聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)是由美國PECetus公司的KaryMullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學(xué)獎)建立的。這項技術(shù)可在試管內(nèi)的經(jīng)數(shù)小時反應(yīng)就將特定的DNA片段擴(kuò)增數(shù)百萬倍，這種*獲取大量單一核酸片段的技術(shù)在分子生物學(xué)研究中具有舉足輕重的意義，較大地推動了生命科學(xué)的研究進(jìn)展。它不僅是DNA分析zui常用的技術(shù)，而且在DNA重組與表達(dá)、基因結(jié)構(gòu)分析和功能檢測中具有重要的應(yīng)用**。

　　PCR可以被認(rèn)為是與發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制過程相似的技術(shù)，其結(jié)果都是以原來的DNA為模板產(chǎn)生新的互補(bǔ)DNA片段。細(xì)胞中DNA的復(fù)制是一個非常復(fù)雜的過程。參與復(fù)制的有多種因素。PCR是在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，基本原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相似，但反應(yīng)體系相對較簡單。

　　PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：

　?、倌０錎NA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備;

　　②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合;

　?、垡锏难由欤篋NA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。

　　重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。

　　三、實驗試劑與器材

　　模板DNA、2.5mmol/LdNTP

　　TaqDNA聚合酶(5U/μL)、SSR引物

　　10×buffer、15mmol/LMg2+、ddH2O

　　PCR儀、移液槍、PCR板

　　四、實驗步驟

　　1、配制20μL反應(yīng)體系，在PCR板中依次加入下列溶液：

　　模板DNA2μL

　　引物11μL

　　引物21μL

　　dNTP1.5μL

　　MgCl22μL

　　10×buffer2μL

　　ddH2O10μL

　　Taq酶0.5μL

　　2、設(shè)置PCR反應(yīng)程序。

　　3、上樣，啟動反應(yīng)程序。

　　4、擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測。

　　PCR技術(shù)原理、實驗步驟和應(yīng)用!先和大介紹到這，如果想要了解更多PCR的信息，可以關(guān)注天津本生生物，專業(yè)給生物醫(yī)藥客戶提供生物實驗室檢測耗材，歡迎廣大客戶來詢。


本生（天津）健康科技有限公司專注于愛思進(jìn)八連管,羅氏**PCR板,濾芯吸頭等

• 詞條

  詞條說明

• **微量分光光度計與紫外分光光度計區(qū)別！

  本生（天津）健康科技有限公司供應(yīng)分光光度計、**微量分光光度計、**微量紫外分光光度計、紫外可見分光光度計等實驗室儀器，我們秉承創(chuàng)新、專業(yè)、可靠的質(zhì)量方針，以優(yōu)良的品質(zhì)，周到的服務(wù)，在用戶中樹立起了良好的口碑。 一、**微量分光光度計、**微量紫外分光光度計的用途及應(yīng)用： 1、除了擁有傳統(tǒng)的分光光度計功能（光度測量、標(biāo)準(zhǔn)曲線測量、光譜掃描、動力學(xué)測試等）以外，還有蛋白質(zhì)測試功能和核酸測試功能； 2、蛋白質(zhì)

• 如何利用血清瓶進(jìn)行血清的滅活操作

  如何利用血清瓶進(jìn)行血清的滅活操作 作為細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用不言而喻，而血清的好壞、無菌程度也是決定實驗成功與否的關(guān)鍵，那么，怎樣對血清進(jìn)行滅活操作呢，這就需要用到血清瓶。 血清滅活操作步驟如下： 1、選擇一個和血清瓶一樣的瓶子作為對照瓶，把對照瓶內(nèi)倒入和血清等體積的蒸餾水，作溫度的測量。 2、溫度的調(diào)節(jié)。在對照組的瓶子里插入兩個水銀溫度計，放在水浴箱，在溫度計顯示56度時

• 移液管的使用步驟及注意事項!

  移液管的使用步驟： 1、使用時應(yīng)先將移液管洗凈，自然瀝干。 2、用待量取的溶液潤洗2-3次，用右手拇指及中指捏住管頸標(biāo)線以上的地方。 3、左手拿像皮球輕輕將溶液吸上，眼睛注意上升的液面。 4、當(dāng)液面上升到標(biāo)線約1cm以上時，*用右手食指堵住管口。 5、取出移液管，用濾紙拭干移液管下端及外壁。 6、稍稍松開右手食指，使液面緩緩下降，至凹液面與標(biāo)線相切。 7、再將移液管移入準(zhǔn)備接受溶液的容器中，使

• 50ml滅菌離心管現(xiàn)特價促銷中!

  50ml滅菌離心管現(xiàn)特價促銷中。。。 現(xiàn)價/促銷價 多買優(yōu)惠多多，快快行動吧！ 1200/560 50ml滅菌離心管 微量離心管 本生生物公司供應(yīng)：分光光度計，熒光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量離心管，進(jìn)口凍存管，細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，色譜耗材，針頭過濾器。 CG編號 產(chǎn)品描述 包裝規(guī)格 23-2275 50ml 離心管,PP(聚丙烯), 5色蓋, 印刷標(biāo)記區(qū), 無DNA