島津色譜柱的選購指南-南昌星楓儀器

時間：2016-01-05

高效液相色譜柱的選擇

現(xiàn)代高效液相色譜中，分離效果好壞的一個重要指標是色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，因此，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。

? ? 一、硅膠基質(zhì)填料

? ? 1、正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團胺基團，如（NH2，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。

? ? 由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

? ? 2、反向色譜反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分先被沖洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有較強的保留。

? ? 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

? ? 二、聚合物填料聚合物填料多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要優(yōu)點是在PH值為1—14均可使用。相對于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有較強的疏水性；大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

? ? 三、其它無機填料其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化由于其特殊的性質(zhì)，一般**于特殊的用途。如，石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力較強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，由于在HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點是可以在PH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強，應用范圍受到一定限制，所以未能廣泛應用。新型色譜氧化鋯基質(zhì)填料也可用于HPLC。商品化的只有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用PH1-14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是較近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進行之中。

? ? 怎樣選擇填料粒度目前，商品化的色譜填料粒度從1um到**過30um均有銷售，而目前分析分離主要用3和5um填料進行。填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數(shù)，即柱效和背壓。粒度越小，柱壓越大，柱壓的增加限制了粒度小于3um的填料應用。在相同選擇性條件下，提高柱效可提高分離度，但不是的因素。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用較小的粒度的填料是很有用的。3um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍。與此同時，柱效提高意味著在相同條件下可以選用較短的色譜柱，即相同的塔板數(shù)或分離能力，但是柱長較短，以縮短分析時間。另外，可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色譜柱的壓力。

島津色譜柱---色譜柱的填充及性能說明

? ?色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外，還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下，填料粒度＞20μm時，干法填充制備柱較為合適；顆粒＜20μm時，濕法填充較為理想。

填充方法一般有4種/

①高壓勻漿法，多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充；

②徑向加壓法，Waters**；

③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱；

④干法，柱填充的技術(shù)性很強，大多數(shù)實驗室使用已填充好的商品柱。

? ?必須指出，高效液相色譜柱的獲得，裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié)，但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣，以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理。

? ?無論是自己裝填的還是購買的色譜柱，使用前都要對其性能進行考察，使用期間或放置一段時間后也要重新檢查。柱性能指標包括在一定實驗條件下（樣品、流動相、流速、溫度）下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復性，或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復性在±5%或±10%以內(nèi)。進行柱效比較時，還要注意柱外效應是否有變化。一份合格的色譜柱評價報告應給出柱的基本參數(shù)，如柱長、內(nèi)徑、填料的種類、粒度、色譜柱的柱效、不對稱度和柱壓降等。

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