復(fù)合飼料煙酸、葉酸、維生素ABCDE檢測(cè)液相色譜儀

時(shí)間：2013-04-09作者：杭州賽析科技有限公司瀏覽：70

 

1 簡(jiǎn)介
復(fù)合飼料煙酸、葉酸、維生素ABCDE檢測(cè)液相色譜儀常用于檢測(cè)復(fù)合預(yù)混料中煙酸、葉酸、維生素ABCDE測(cè)定—*液相色譜法。
本檢測(cè)方法適用于復(fù)合預(yù)混料和維生素預(yù)混料中煙酸、葉酸的測(cè)定。測(cè)量范圍為每千克樣品中含煙酸的量在1000mg以上，含葉酸的量在500mg以上。歡迎前來(lái)訂購(gòu)501液相色譜儀。
2 引用標(biāo)準(zhǔn)
下列標(biāo)準(zhǔn)中所包含的條文，通過(guò)在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文本標(biāo)準(zhǔn)出版時(shí)，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會(huì)被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)較新版本的可能性。
GB/T 6682-1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
3 方法原理
試樣中的復(fù)合飼料中煙酸、葉酸、維生素ABCDE用水一甲醇一乙酸混合溶液提取，將濾液注人*液相色譜反相柱上進(jìn)行分離，用紫外檢測(cè)器在280nm波長(zhǎng)處定量測(cè)定。
4 試劑和材料
除特殊注明外，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純.水為蒸餾水，色譜用水為去離子水，符合GB/T 6 682的規(guī)定
4.1 甲醇:優(yōu)級(jí)純。
4.2 三乙胺
4.3 冰乙酸。
4.4 烷磺酸鈉(PICB6):c ( CH3( CH2)5S03Na)= 0.005mol/l{或p( CH3( CH2)5SO3Na)
=941mg/l)。
4.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
4.5.1 煙酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液:稱(chēng)取經(jīng)過(guò)干燥的煙酸標(biāo)準(zhǔn)純品25.0mg,置于250ml,棕色容量瓶中，用移動(dòng)相溶解，稀釋至刻度，于冰箱保存，可放置一周。
4.5. 2 葉酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液:稱(chēng)取經(jīng)過(guò)干燥的葉酸標(biāo)準(zhǔn)純品25.0mg,置于250ml容量瓶中，用碳酸鈉溶液(4.8) 溶解，調(diào)至pH7.0定容至刻度，于冰箱保存。
4.5. 3 煙酸、葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確吸取4.5. 1和4.5.2各10ML，用移動(dòng)相稀釋至50ml或100M L該混合標(biāo)準(zhǔn)溶液置于帶蓋小瓶貯存，供液相色譜儀分析用，當(dāng)日使用。
4.6 提取液:取500mL去離子水，加10mL冰乙酸(4.3),1.3ml三乙胺(4.2)，用去離子水定容至
1l，此時(shí)pH為3.2，過(guò)0.45um濾膜，取上述溶液850m L與150m L甲醇(4.1)混合
4.7 磷酸緩沖液:稱(chēng)取4.84g的磷酸氫二鉀(K2HP04),9.82g磷酸二氫鉀(KH2P04),溶于去離子水中，加20ml乙臘，用去離子水定容至1L,混勻用2000氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH至6.5
4.8 碳酸鈉溶液:c(Na2CO3)=0.1mol/L.
5 儀器、設(shè)備
5.1 實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備
5.2 超聲波水浴
5.3 **純水裝置(Millipore或全磨口玻璃蒸餾器)
5.4 離心機(jī):3000r/min
5.5 *液相色譜儀:復(fù)合飼料煙酸、葉酸、維生素ABCDE檢測(cè)液相色譜儀
6 試樣制備
選取有代表性的樣品至少500g，四分法縮減至100g,磨碎，全部通過(guò)0.28m m孔篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存?zhèn)溆谩?br /> 7 分析步駭
7.1 試驗(yàn)溶液的制備
稱(chēng)取試樣維生素預(yù)混料0.5- 1g或復(fù)合預(yù)混料1-5g,**至0.0001g,置于100mL棕色容量
瓶中，加10mL碳酸鈉溶液(4.8)，浸濕試樣加70mL提取液(4.6)混勻，于超聲波水浴上振蕩提取15min，用提取液定容至刻度，混合均勻，過(guò)濾或離心。再經(jīng)0.45um過(guò)濾膜過(guò)濾至帶蓋小瓶中，調(diào)整該試驗(yàn)溶液的濃度≤5ug/mL，供*液相色譜分析用。
7.2 測(cè)定
7.2.1 色譜條件
7.21.1 反相離子對(duì)色譜條件
柱長(zhǎng):250mm、內(nèi)徑4.0mm不銹鋼柱。
固定相:vertex ODS(C18)粒度5um,
移動(dòng)相:取500m L去離子水，加10ml冰乙酸,1.3ml三乙胺，一小瓶20ml乙烷磺酸鈉(4.4),
用去離子水定容至1L，調(diào)節(jié)pH為3.2，過(guò)0.45um濾膜，取上述溶液850mL與150mL甲醇混合，脫氣
流速 :1.0mL/min,
溫度 :30℃。
進(jìn)樣量 : 20ul。
檢測(cè)器 : 紫外檢測(cè)器，使用波長(zhǎng)275nm
7.2.1.2 反相色譜
柱長(zhǎng) :25cm，內(nèi)徑4mm，不銹鋼柱。
固定相 : LichrospherCH-8/11.,粒度5um
移動(dòng)相 : 2%乙睛磷酸緩沖液(4.7)
流速 : 1.4mL/min.
溫度 :室溫。
進(jìn)樣體積 :20uL.
檢測(cè)器 : 紫外檢測(cè)器，使用波長(zhǎng)280nm.
7.2.2 定量測(cè)定
按*液相色譜僅說(shuō)明書(shū)調(diào)整儀器操作參數(shù)和靈敏度(AUFS)，色譜峰分離度符合要求用兩次以上相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作液對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校正。向色譜柱注入相應(yīng)的煙酸、葉酸標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.5.3Vg1)和試驗(yàn)溶液7.1Vi)得到色譜峰面積響應(yīng)值(Psi,Pi，用外標(biāo)法定量測(cè)定
 
以上標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17813-1999
關(guān)鍵詞：*液相色譜儀，復(fù)合飼料中煙酸、葉酸，維生素ABCDE，測(cè)定

 


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