百螢課堂之pH熒光探針Protonex 紅600實(shí)驗(yàn)方案

時間：2024-10-22作者：西安百螢生物科技有限公司瀏覽：8

一、百螢 pH熒光探針Protonex 紅600參數(shù)

 

Ex(nm)       576           

Em(nm)       597

分子量       698.94

溶  劑       DMSO

存儲條件     在-15℃以下保存，避光防潮

 

 

二、百螢 pH熒光探針Protonex 紅600概述

 

Protonex Red染料顯示出pH依賴性熒光。與大多數(shù)在較高pH下熒光較強(qiáng)的熒光染料不同，酸性條件可增強(qiáng)Protonex Red染料的熒光。隨著pH從中性降低到酸性，Protonex Red染料的熒光急劇增加。細(xì)胞外缺乏熒光消除了洗滌步驟。Protonex Red染料為監(jiān)測酸性細(xì)胞區(qū)室（如內(nèi)體和溶酶體）提供了強(qiáng)大的工具。Protonex Red染料在細(xì)胞外是非熒光的，但在酸性區(qū)室（如吞噬體，溶酶體和內(nèi)體）中發(fā)出明亮的紅色熒光。這種Protonex Red可以對細(xì)胞酸性隔室進(jìn)行特異性檢測，降低信號可變性，提高成像或流量應(yīng)用的準(zhǔn)確度。它還可以用于多重細(xì)胞功能分析與綠色染料，如GFP，F(xiàn)luo-8，鈣黃綠素或FITC標(biāo)記的抗體。Protonex Red具有與德克薩斯紅相似的光譜特性，使得普通的德克薩斯紅過濾器可用于Protonex Red的分析。




圖1.用 Protonex Red紅 600 染色的活 HeLa 細(xì)胞的圖像。將活 HeLa 細(xì)胞接種到 96 孔板中并培養(yǎng)過夜。除去生長培養(yǎng)基后，用 Hanks 平衡鹽溶液 (HBSS) 洗滌細(xì)胞，然后用 0.6 μM Protonex Red紅 600 在 37°C 下染色 30 分鐘。染色后，再次用 HBSS 洗滌細(xì)胞，并使用帶有 TRITC 濾光片的熒光顯微鏡成像。










          圖2.Protonex Red 紅600 的 pH 依賴性**光譜。




三、百螢 pH熒光探針Protonex 紅600實(shí)驗(yàn)方案

 

操作步驟

在制作Protonex 工作溶液之前，根據(jù)需要處理細(xì)胞。

 1.在DMSO中制備1至10 mM Protonex 儲備液。通過將DMSO儲備溶液稀釋到含有20mM Hepes緩沖液（HHBS）或所選緩沖液的Hanks溶液中，制備0.1至10μM的工作溶液。

 2.根據(jù)需要處理細(xì)胞，將細(xì)胞與Protonex 工作溶液在37oC下孵育15分鐘至2小時。

 3.用HHBS緩沖液替換染料加載溶液。

 4.使用配有正確濾光片組的適當(dāng)熒光儀器分析細(xì)胞














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