百螢課堂之膜電位通道

    膜電位是細(xì)胞內(nèi)部和外部之間的電壓差。膜電位允許細(xì)胞充當(dāng)電池,為嵌入膜中的各種分子裝置提供動(dòng)力。在神經(jīng)元等可電興奮的細(xì)胞中,膜電位用于在細(xì)胞的不同部分之間傳遞信號(hào)。膜中某一點(diǎn)離子通道的打開(kāi)或關(guān)閉會(huì)導(dǎo)致膜電位的局部變化,從而導(dǎo)致電流流向膜中的其他點(diǎn)。離子通道已被確定為重要的藥物發(fā)現(xiàn)目標(biāo)。

     

    由于主動(dòng)過(guò)程維持的K+ Na+Cl-濃度梯度,細(xì)胞質(zhì)膜的跨膜電位通常為70mV(內(nèi)部為負(fù))。盡管熒光離子指示劑可用于直接測(cè)量特定離子濃度的變化,但電位探針提供了一種間接方便的方法來(lái)檢測(cè)這些離子的易位。電位光學(xué)探針使研究人員能夠在對(duì)微電來(lái)說(shuō)太小的細(xì)胞器和細(xì)胞中進(jìn)行膜電位測(cè)量。此外,結(jié)合成像技術(shù),這些探針可用于繪制可興奮細(xì)胞、灌注器官和終在體內(nèi)大腦中的膜電位變化,具有使用微電無(wú)法獲得的空間分辨率和采樣頻率。膜電位的增加和減少在許多生理過(guò)程中起著作用,包括神經(jīng)沖動(dòng)傳播、肌肉收縮、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和離子通道門(mén)控。

     

    電位探針是研究這些過(guò)程的主要工具,也是可視化線粒體(其跨膜電位約為150mV,基質(zhì)內(nèi)為負(fù))、評(píng)估細(xì)胞活力和高通量篩選新候選藥物的重要工具。電位探針包括陽(yáng)離子或兩性離子丙乙烯染料、陽(yáng)離子碳花青和羅丹明,以及陰離子氧代醇。染料的種類決定了細(xì)胞中的積累、反應(yīng)機(jī)制和毒性等因素。為特定應(yīng)用選擇好的電位探針可能會(huì)因其光學(xué)響應(yīng)、光毒性和與其他分子相互作用的明顯變化而變得復(fù)雜。有兩類基于其響應(yīng)機(jī)制的膜電位探針:快速響應(yīng)和慢響應(yīng)膜電位染料。

     

    快速響應(yīng)膜電位探針

     

    快速響應(yīng)探針具有響應(yīng)周圍電場(chǎng)變化的熒光,他們的光學(xué)響應(yīng)足夠,可以可興奮細(xì)胞(包括單個(gè)神經(jīng)元、心臟細(xì)胞和完整大腦)的瞬時(shí)(毫秒)電位變化。然而,它們依賴于電位的熒光變化的幅度通常很小,通常每mV0.02-0.1%的熒光強(qiáng)度變化。

     

    慢響應(yīng)膜電位探針

    慢響應(yīng)探針在其跨膜分布中表現(xiàn)出電位依賴性變化,并伴有熒光變化。它們的光學(xué)響應(yīng)幅度遠(yuǎn)大于快速響應(yīng)探針的幅度,通常每mV1%的熒光變化。慢響應(yīng)探針,包括羅丹明以及陰離子氧代醇,適用于檢測(cè)由呼吸活動(dòng)、離子通道通透性、藥物結(jié)合和其他因素引起的非興奮性細(xì)胞平均膜電位的變化。


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