熒光共振能量轉移（FRET）

時間：2024-01-03

熒光共振能量轉移 (FRET) 是兩個發(fā)色團（供體分子和受體分子）之間依賴于距離的能量轉移。當靠近時，電子激發(fā)的供體生色團可以通過分子內長程偶-偶耦合相互作用以非輻射方式將能量轉移到受體生色團。因此，能量的轉移淬滅了供體的熒光強度并減少了其激發(fā)態(tài)壽命，同時增加了受體生色團的排放系數(shù)。由于 FRET 的效率取決于分子間分離的反六次方，因此它是一種有利的技術，可用于研究產生分子接近度變化的各種生物現(xiàn)象，包括受體-配體相互作用、空間分布、蛋白質復合物的組裝以及膜電位傳感。

AAT Bioquest 提供多種熒光供體和受體對以及非熒光Tide Quencher?和BXQ 染料，用于工程基于 FRET 的生物傳感器，以及用于研究冠狀病毒蛋白酶活性和免洗、時間分辨 FRET 測定的 FRET 肽。監(jiān)測 G 蛋白偶聯(lián)受體系統(tǒng)中腺苷酸環(huán)化酶的。

FRET 的三個主要條件

雖然許多因素會影響 FRET 效率，但 FRET 發(fā)生滿足以下三個主要條件：

1. 供體分子和受體分子彼此非常接近，通常為 10-100 ? (1-10 nm)。FRET 效率 (E) 由方程 E = R₀?/(R₀? + r?) 定義，其中 R₀是F?rster半徑，r 是供體分子和受體分子之間的實際距離。F?rster半徑是50%的激發(fā)能從供體轉移到受體的距離，R₀值通常在10-100 ?之間。由于FRET發(fā)生的可能性增加，在這個范圍的較具有R₀值的FRET對通常是的。

2. 受體的吸收或激發(fā)光譜與供體的熒光**光譜重疊（圖1）。它們重疊的程度稱為光譜重疊積分（Jλ，灰色陰影區(qū)域）。Jλ 的程度越大，發(fā)生 FRET 的可能性就越大。

3.供體和受體躍遷偶子方向近似平行。

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FRET光譜重疊積分的示意圖（以灰色陰影顯示）

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