醫(yī)院病理科**污水處理設(shè)備
常用的固定劑:
1)10%福爾馬林緩沖液(pH7.4)2)4%多聚甲醛磷酸緩沖液(pH7.4) 3)Bouin液 4)Zamboni’s液 5)丙酮 6)95%乙醇 7)A-F液 7.何謂脫水,脫水的目的、常用脫水劑及脫水注意事項(xiàng)。
定義:利用某種化學(xué)試劑逐步將標(biāo)本內(nèi)部吸收的水分置換出來,以使標(biāo)本處于無水狀態(tài),這一過程叫脫水。 目的和原則1有利于標(biāo)本的下一步處理,即透明、浸透、包埋 2有利于切片的操作 3有利于標(biāo)本的長(zhǎng)久保存
常用的脫水劑:1.單純脫水劑:如乙醇、丙酮和甲醇 2.脫水兼透明劑:如正丁醇、叔丁醇等
注意事項(xiàng):脫水時(shí)必須由低濃度脫水劑開始,逐步轉(zhuǎn)入高濃度脫水劑,經(jīng)過各級(jí)濃度的脫水劑使其所含的水分逐漸減少而代之以脫水劑。防止組織過度收縮變形,或脫水不完全而影響制片效果。
8.石蠟包埋程序
1)組織取材3mm厚度,固定于福爾馬林?jǐn)?shù)小時(shí)后再換以新鮮福爾馬林固定數(shù)小時(shí)。
2)組織流水沖洗6-12h。
3)70%酒精2-4h。
4)80%酒精2-4h。
5)90%酒精2-4h。
6)95%酒精(Ⅰ、Ⅱ)2-4h。
7)100%酒精(Ⅰ、Ⅱ )1-2h。
8)二甲苯(Ⅰ)5-30min。
9)(二甲苯(Ⅱ) 5-30min)。
10)浸蠟(Ⅰ、Ⅱ )2h。
11)組織包埋
9、石蠟切片與冰凍切片的優(yōu)缺點(diǎn)?
石蠟切片優(yōu)點(diǎn)1.標(biāo)本大小靈活2.切片厚度均勻(1-200μm)3.可少量或批量制作4.切片保持時(shí)間長(zhǎng) 缺點(diǎn)1.不能很好地保存細(xì)胞組織內(nèi)酶或抗原的活性2.脂肪被溶解3.不能**大且堅(jiān)硬組織的切片質(zhì)量
冰凍切片法優(yōu)點(diǎn)? 切片制作時(shí)間短? 較好的保存脂肪和類脂、酶及抗原活性? 可應(yīng)用于脂肪顯示,酶的定位、定性甚至定量、組織熒光、*熒光和放射自顯影等方面
缺點(diǎn)? 標(biāo)本結(jié)構(gòu)和形態(tài)的顯示遜色于石蠟切片? 冷凍過程中易形成“冰晶”? 難以制作連續(xù)切片和薄的切片
10、染色的目的,普通染色、特殊染色、復(fù)染色定義。常用染色方法。
染色的目的:將標(biāo)本切片浸于染色劑內(nèi),經(jīng)一定的時(shí)間,使組織或細(xì)胞及其他的成分被染上不同的顏色,產(chǎn)生不同的折射率,便于在光鏡下進(jìn)行觀察。
普通染色:較廣泛應(yīng)用的是蘇木精和伊紅染色,又稱常規(guī)染色。 特殊染色:為顯示特定的組織結(jié)構(gòu)或其他的特殊成分。 復(fù)染色:襯托主染色所進(jìn)行的染色。 常用的染色方法 一)蘇木精(素):是現(xiàn)今較常用、較有**的常規(guī)細(xì)胞核染色劑,習(xí)慣上稱蘇木精是堿性染料 二)伊紅:是一種胞漿較理想的染色劑。常用伊紅Y。酸性染料組織成分呈彌漫性染色。
11、石蠟切片常規(guī)染色步驟。
1) 脫蠟至水
①二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各5-10min②**乙醇 (5~10)min×2或3次③依次95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各5~10min④蒸餾水浸洗 2~5min 2)蘇木精染色:
① 蘇木精1-10min。② 自來水流水沖洗。③ 0.5%鹽酸-乙醇分色,數(shù)秒-數(shù)十秒。自來水快洗。
④ 0.5%氨水藍(lán)化,30sec-1min,自來水沖洗⑤ 光鏡下鏡檢細(xì)胞核分色程度。⑥ 自來水流水沖洗3min。
3)伊紅染色
① 1%伊紅1-10min。 ② 蒸餾水快洗。
5.脫水、透明和封固:
① 70%、80%、90%乙醇速洗,每級(jí)數(shù)秒-數(shù)十秒。② 95%30sec-1min.光鏡下監(jiān)控細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)顏色對(duì)比。 ③ **乙醇,3-5min,2次。④ 二甲苯Ⅰ、Ⅱ,各5-10min。⑤ 封片:中性樹膠
12、組織化學(xué)定義及特征。
組織化學(xué)(histochemistry)或細(xì)胞化學(xué)(cytochemistry):是基于已知的化學(xué)反應(yīng),在組織或細(xì)胞原位上顯示出組織或細(xì)胞中的化學(xué)物質(zhì),并研究其化學(xué)性質(zhì)及功能關(guān)系的一門技術(shù)。是在形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上,研究組織或細(xì)胞中化學(xué)物質(zhì)的形態(tài)、化學(xué)成分及定位、定量和代謝狀態(tài)的學(xué)科。
組織化學(xué)的特征:應(yīng)用物理的和化學(xué)的方法來查明細(xì)胞或組織的化學(xué)成分; 用組織學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)原理,研究細(xì)胞或組織的結(jié)構(gòu)、功能與化學(xué)的關(guān)系;
對(duì)細(xì)胞或組織成分的定位、定性、定量的特征進(jìn)行研究,來認(rèn)識(shí)細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。 具有較強(qiáng)的特異性。
13、組織化學(xué)技術(shù)的基本要求。
為了能在完好的結(jié)構(gòu)上同時(shí)顯示其化學(xué)物質(zhì),組織化學(xué)技術(shù)必須做到: (1)保存組織(細(xì)胞)在生活狀態(tài)下的結(jié)構(gòu);
(2)保存組織(細(xì)胞)內(nèi)的生前化學(xué)成分、酶活性及檢測(cè)目的物;
(3)所使用的染色方法是按照已知的化學(xué)或物理反應(yīng)原理進(jìn)行。
(4)反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)在組織結(jié)構(gòu)上形成穩(wěn)定的有色沉淀物質(zhì)。
(5)檢測(cè)手段要有高度的敏感性、特異性和可重復(fù)性。
(6)生成物的反應(yīng)產(chǎn)物必須在原位沉淀,保證定位的精確性及穩(wěn)定性。
14、組織(細(xì)胞)化學(xué)基本步驟冰凍切片或石蠟切片等常規(guī)處理后,再進(jìn)行組織(細(xì)胞)化學(xué)染色,在光鏡下觀察。
影響酶活性的因素:
1 、溫度:大部分酶反應(yīng)的合適溫度為37℃。
2、 pH: 酶有適合酶反應(yīng)速度的pH(大部分為7.0
3、抑制劑 能使酶活性降低的物質(zhì)
4、激活劑 能使酶活性增高的化學(xué)物質(zhì)
5 、底物濃度對(duì)酶反應(yīng)速度的影響
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詞條
詞條說明
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