TwistDx公司重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA）

時(shí)間：2023-06-06作者：北京立博泰業(yè)科技有限公司瀏覽：85

TwistDx 的重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）將徹底改變?cè)谫Y源有限的現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境中擴(kuò)增和檢測(cè)核酸的能力。

RPA 技術(shù)原理

RPA 體系的重點(diǎn)是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復(fù)合體，并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對(duì)。單鏈 DNA 結(jié)合（SSB）蛋白與被取代的 DNA 鏈結(jié)合，并使形成的 D 環(huán)保持穩(wěn)定。然后從引物啟動(dòng)由聚合酶介導(dǎo)的 DNA 擴(kuò)增，但前提是存在靶標(biāo)序列。一旦啟動(dòng)，擴(kuò)增反應(yīng)將快速進(jìn)行，因此開(kāi)始時(shí)只需一點(diǎn)靶標(biāo) DNA 拷貝數(shù)，高特異性 DNA 擴(kuò)增在數(shù)分鐘內(nèi)即可達(dá)到可檢出水平。

RPA 循環(huán)


RPA 的技術(shù)特點(diǎn)

為什么選擇 RPA 方法?

◇ 速度

RPA 非?？焖?，在 37～42 °C 這一通常較適宜的反應(yīng)溫度下，只需少量核酸分子即可在 3～10 分鐘（通常）內(nèi)擴(kuò)增至可檢出水平，但這將取決于靶標(biāo)大小。在大部分情況下，只需要一個(gè)人即可在半小時(shí)內(nèi)采集樣本、制備樣本、運(yùn)行檢測(cè)并**結(jié)果，并且*專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)。

◇ 靈敏度

RPA 可檢測(cè)復(fù)合樣本中的單拷貝 DNA 和 10 拷貝甚至較少 RNA，而*預(yù)先純化核酸。

◇ 特異性

RPA 具有高度特異性，該技術(shù)可從可能含有數(shù)百納克來(lái)自多個(gè)不同物種的不相關(guān)復(fù)合基因組 DNA（包括人 DNA）的樣本中識(shí)別并擴(kuò)增單個(gè) DNA 分子，抗干擾能力強(qiáng)。

◇ 恒溫運(yùn)行

RPA 在恒定的低溫（37～42 °C 較適宜）下運(yùn)行。對(duì)于某些應(yīng)用，如果需要，即便體溫也可支持 RPA 擴(kuò)增。該反應(yīng)在偏離溫度及低溫設(shè)置下也表現(xiàn)穩(wěn)健，即使在常規(guī)室溫 25 °C 下也將奏效，雖然反應(yīng)速度會(huì)下降; 在此溫度下，只要此生物化學(xué)過(guò)程被正確配置，仍可在一小時(shí)內(nèi)獲得結(jié)果。

◇ 樣本容差

RPA 對(duì)樣本類(lèi)型的要求寬松，有時(shí)可直接檢測(cè)未經(jīng)核酸純化的原始樣本，例如血液、鼻拭子或培養(yǎng)基。通常，只需采用基本的病原體裂解方法處理樣本以釋放核酸即可，例如熱處理或弱堿處理。每種檢測(cè)所需的較合適的樣本制備方法取決于病原體滴定度、是否存在抑制劑以及裂解要求等因素，并將需要設(shè)計(jì)到檢測(cè)程序中。RPA 對(duì)某些復(fù)合樣本類(lèi)型的寬容性使該技術(shù)非常適合廣泛的現(xiàn)場(chǎng)實(shí)地應(yīng)用。

◇ 廣泛的適用性

RPA 能夠方便地應(yīng)用于任何 DNA 或 RNA 靶標(biāo)，無(wú)序列偏好性，這一點(diǎn)對(duì)于 NGS 尤其重要。如果將逆轉(zhuǎn)錄酶添加到反應(yīng)混合液中開(kāi)發(fā)出了**高靈敏度的 RNA 一步檢測(cè)法。

◇ 多重檢測(cè)

通過(guò)將多種引物同時(shí)添加到同一反應(yīng)管中，單次 RPA 測(cè)試即可擴(kuò)增和檢測(cè)多種不同的靶標(biāo)。

◇ 低設(shè)備成本

RPA 僅需要基本的檢測(cè)設(shè)備，也就是說(shuō)，較終用戶(hù)可以使用 RPA 技術(shù)開(kāi)發(fā)出適合各種應(yīng)用和環(huán)境的人性化診斷方法和試劑盒。

◇ 靈活的試劑形態(tài)

**反應(yīng)組分能夠以穩(wěn)定的干燥形態(tài)供貨，該形態(tài)易于運(yùn)輸，且*冷藏即可儲(chǔ)存較多 12 個(gè)月（穩(wěn)定性可能因用途不同而有變化，因此仍建議在冷藏條件下長(zhǎng)期儲(chǔ)存），也能夠以 PCR 試劑較常見(jiàn)的液體形態(tài)供貨，該形態(tài)允許用戶(hù)針對(duì)特定的應(yīng)用改變反應(yīng)體積和組分比例。

◇ 多種檢測(cè)形式

RPA 可應(yīng)用于各種檢測(cè)系統(tǒng)和儀器，包括實(shí)時(shí)熒光探針和夾心法等形式。


RPA 與 其他核酸擴(kuò)增方法 PCR 及 LAMP 的比較







北京立博泰業(yè)科技有限公司專(zhuān)注于離心機(jī),三代測(cè)序,純水儀,正倒置一體研究級(jí)顯微鏡等

• 詞條

  詞條說(shuō)明

• RPA是什么？

  概念：重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被稱(chēng)為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴(lài)于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，較佳反應(yīng)溫度在37°C左右。RPA技術(shù)原理：重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中

• DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑是什么？

  DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑是一種用于DNA擴(kuò)增的試劑，它可以在恒溫條件下快速擴(kuò)增DNA序列。與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比，DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑不需要復(fù)雜的溫度循環(huán)，只需要在恒溫條件下進(jìn)行反應(yīng)即可。這種試劑可以在短時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增出大量的DN段，具有、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑的原理是利用一種特殊的酶——Bst DNA聚合酶，它可以在高溫下具有DNA聚合酶活性，同時(shí)還具有5’→3’外切酶活性。在反應(yīng)

• RPA技術(shù)有哪些特性？能實(shí)現(xiàn)多重化嗎？

  快速檢測(cè) 15min進(jìn)行單分子檢測(cè)試驗(yàn)， 簡(jiǎn)易包裝 穩(wěn)定凍干形式試劑. *熱循環(huán)過(guò)程 擺脫任何儀器束縛. 便攜 設(shè)備要求低，貧瘠條件亦能 完成檢測(cè)★RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎？可以。RPA技術(shù)支持在同一個(gè)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)。不過(guò)，多重化的引物組合需要精心設(shè)計(jì)，以便每個(gè)引物都能同樣有效的工作。需要注意的是，RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)較好不要**標(biāo)太多。如果在一個(gè)反應(yīng)中使用兩個(gè)以上的擴(kuò)增引物，就

• TwistDx公司重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（RPA）

  TwistDx 的重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）將徹底改變?cè)谫Y源有限的現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境中擴(kuò)增和檢測(cè)核酸的能力。RPA 技術(shù)原理RPA 體系的重點(diǎn)是重組酶，這些酶與寡核苷酸引物形成復(fù)合體，并使引物與雙鏈 DNA 中的同源序列配對(duì)。單鏈 DNA 結(jié)合（SSB）蛋白與被取代的 DNA 鏈結(jié)合，并使形成的 D 環(huán)保持穩(wěn)定。然后從引物啟動(dòng)由聚合酶介導(dǎo)的 DNA 擴(kuò)增，但前提是存在靶標(biāo)序列。一旦啟動(dòng)，擴(kuò)增反應(yīng)將快速進(jìn)行，