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定量基礎(chǔ)
在光致發(fā)光中,**出的輻射總依賴于所吸收的輻射量。由于一個(gè)受激發(fā)的分子回到基態(tài)時(shí)可能以*躍遷的形式產(chǎn)生能量損失,因而**輻射的光子數(shù)通常都少于吸收輻射的光子數(shù),它以**效率Q來(lái)表示。
在固定的實(shí)驗(yàn)條件下,**效率是個(gè)常數(shù),通常Q小于1。對(duì)可用熒光檢測(cè)的物質(zhì)來(lái)說(shuō),Q值一般在0.1~0.9之間。熒光強(qiáng)度F與吸收光強(qiáng)度成正比。對(duì)于稀溶液,熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)溶液濃度、摩爾吸光系數(shù)、吸收池厚度、入射光強(qiáng)度、熒光的**效率及熒光的收集效率等成正相關(guān)。在其他因素保持不變的條件下,物質(zhì)的熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)溶液濃度成正比,這是熒光檢測(cè)器的定量基礎(chǔ)。熒光檢測(cè)器屬于溶質(zhì)型檢測(cè)器,可直接用于定量分析。
類型
熒光涉及光的吸收和**兩個(gè)過(guò)程,因此任何熒光化合物,都有兩種特征的光譜:激發(fā)光譜(excitation spectrum)和**光譜(emission spectrum)。
**光譜
一般所說(shuō)的熒光光譜,實(shí)際上僅指熒光**光譜。它是在激發(fā)單色器波長(zhǎng)固定時(shí),**單色器進(jìn)行波長(zhǎng)掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(zhǎng)(即**波長(zhǎng),Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì),并作為熒光測(cè)定時(shí)選擇合適的測(cè)定波長(zhǎng)的依據(jù)。
激發(fā)光譜
熒光屬于光致發(fā)光,需選擇合適的激發(fā)光波長(zhǎng)(Ex)以利于檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)可通過(guò)熒光化合物的激發(fā)光譜來(lái)確定。激發(fā)光譜的具體檢測(cè)辦法是通過(guò)掃描激發(fā)單色器,使不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光化合物,產(chǎn)生的熒光通過(guò)固定波長(zhǎng)的**單色器,由光檢測(cè)元件檢測(cè)。終得到熒光強(qiáng)度對(duì)激發(fā)波長(zhǎng)的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的大波長(zhǎng)處,處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目多,即所吸收的光能量也,能產(chǎn)生的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時(shí),測(cè)定應(yīng)選擇激發(fā)波長(zhǎng)。
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詞條
詞條說(shuō)明
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